微波灭菌机理研究的材料与方法

微波灭菌机理研究的材料与方法

1微波炉

    QX微波炉，型号为QX-30HM7，额定微波频率2450MHz，额定输入功率30KW，最大输出功率800W。

2透析袋

    透析袋截留分子量为3500，货号MD34．3．5，干燥时压平宽度(半周长)24mm，购自北京经科宏达生物技术有限公司。

3供试菌种

    枯草芽胞杆菌黑色变种ATCC9372，购自中国科学院微生物所微生物菌种保藏中心。

4培养基

液体普通营养琼脂培养基：蛋白胨109，氯化钠59，牛肉粉159，蒸馏水1000ml。

固体普通营养琼脂培养基：蛋白胨109，氯化钠59，牛肉粉159，琼脂209，蒸馏水1000ml。

5试验菌悬液的制备

    营养细胞制备：250ml的烧杯中盛50ml的营养肉汤培养液，接种2ml的枯草芽胞杆菌黑色

变种ATCC9372芽胞悬液，过夜培养，将过夜培养物在5000rpm转速下离心10min，离心后的沉淀用PBS缓冲液洗涤四次，洗涤后的沉淀加PBS缓冲液，使沉淀悬浮，稀释成所需浓度，倒入灭菌的三角瓶，分装到7ml离心管中备用。

    芽胞制备：将活化的枯草杆菌接种至营养琼脂培养基上，用灭菌曲形棒涂匀，然后在37℃条件下培养。5天后室温培养，在芽胞率达到90％以上时用灭菌勺子刮下芽胞。用灭菌脱脂棉过滤，除去刮下来的琼脂。在45。C的摇床中震荡24小时，使其断链，将枯草杆菌分散成单个芽胞。将枯草芽胞杆菌在7000rpm下离心15min，倾去上清液，加入蒸馏水重新悬浮，然后离心，重复2次。在8012水浴中保温10min，杀灭繁殖体。然后在7000rpm条件下离心。用蒸馏水将芽胞稀释成所需浓度，分装刮7ml离心管中备用a-15"C条件F保存。芽胞每月制备。

    6透析袋的处理

    将透析袋剪成适当K度(10em)-在^体积的2％(m／v)碳酸氢钠和IrrtmoULEDTA(PH=8 0)中将透析袋煮沸IO分钟，将透析袋州蒸馏水彻底漂洗，将透析袋置ImfnolfL EDTA(PH=80)中煮沸10分钟，特透析袋冷却，存放丁4"0，J蝴商保透析袋始终浸没在液体中(从此步起片透析袋时定要戴手彝操作)，在使州自口州燕馏水将透析袋里外加以清洗。